乳(rǔ)糖(táng)和蔗(zhè)糖(táng)的檢測(cè)

摘要：本(běn)實驗根據(jù)中國藥典2010版二(èr)部乳糖項下測試(shì)方法，采(cǎi)用液相色(sè)譜 （HPLC） 法結(jié)合示(shì)差折光檢測器(qì)分離乳(rǔ)糖與蔗(zhè)糖，並(bìng)選(xuǎn)擇了4種不同類型(xíng)的氨基柱對乳糖和蔗糖(táng)的(dí)保留(liú)及分(fēn)離(lí)情(qíng)況(kuàng)進行(háng)了(liǎo)考察(chá)。結(jié)果表(biǎo)明：流(liú)動(dòng)相為乙腈(jīng):水=75:25（v/v），使用Innoval NH₂色譜柱（5 μm，100Å，4.6×250 mm） 對兩(liǎng)種物質的分離度為(wéi)2.44，實現(xiàn)了(liǎo)乳糖(táng)和蔗(zhè)糖的良(liáng)好分離(lí)，且各物(wù)質峰形良好，保留(liú)時間穩定，能夠(gòu)滿足(zú)藥(yào)典(diǎn)要求(qiú)。

關鍵(jiàn)詞：液相色(sè)譜法(fǎ)；示差(chà)檢(jiǎn)測器；乳糖(táng)；蔗糖；氨基(jī)柱；

前言

乳(rǔ)糖(táng)是一(yī)種雙糖，由(yóu)一分子(zǐ)β-D-半乳(rǔ)糖(táng)和一分(fēn)子α-D-葡(pú)萄糖(táng)在β-1，4-位形成(chéng)糖苷鍵(jiàn)相連(lián)，有兩種端基異(yì)構(gòu)體：α-乳(rǔ)糖和β-乳(rǔ)糖，在(zài)水溶液中可(kě)互相(xiāng)轉化(huà)。α-乳糖很容易結合一分(fēn)子(zǐ)結晶(jīng)水。乳糖甜度約是蔗(zhè)糖的六(liù)分之一(yī)。蔗糖容(róng)易(yì)被酸水解(jiě)，水(shuǐ)解(jiě)後產(chǎn)生等(děng)量的D-葡(pú)萄(táo)糖(táng)和D-果(guǒ)糖(táng)，其(qí)不具(jù)有還原(yuán)性。發(fā)酵形(xíng)成(chéng)的焦(jiāo)糖可(kě)以(yǐ)用作醬油(yóu)的增色劑。乳糖(táng)作為(wéi)一種藥(yào)用輔(fǔ)料，以(yǐ)填(tián)充(chōng)劑或(huò)稀釋(shì)劑(jì)的形(xíng)式廣泛(fàn)應用(yòng)於(yú)片劑，膠(jiāo)囊(náng)，顆粒劑(jì)和凍(dòng)幹產品中。然而，一(yī)般藥用乳糖(táng)來源(yuán)於牛奶，可能存在可引起過敏(mǐn)反應的(dí)雜(zá)蛋白。因此，2010版藥(yào)典增(zēng)加了(liǎo)乳糖的檢查(chá)項(xiàng)內(nèi)容(róng)。本實驗以藥典為依(yī)據，實現了乳糖與蔗(zhè)糖(táng)的(dí)良(liáng)好(hǎo)分(fēn)離。

1 實驗部分

1.1 儀(yí)器(qì)，試(shì)劑與(yǔ)材(cái)料

1.1.1 主(zhǔ)要(yào)儀(yí)器(qì)設(shè)備(bèi)

液(yè)相色譜儀(yí)，示差(chà)檢測器

1.1.2 試劑(jì)材料

超純(chún)水；乙(yǐ)腈(jīng)（色(sè)譜純）；蔗糖和(hé)乳糖(táng)（客戶提(tí)供(gōng)，分別(bié)加水溶解(jiě)並(bìng)稀(xī)釋(shì)成(chéng)濃度為10 mg/mL的(dí)儲(chǔ)備溶(róng)液(yè)）

色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)1-6：規格均為(wéi)5 μm，100Å，4.6×250 mm

1.1.3 色譜(pǔ)條件(jiàn)

流動(dòng)相(xiāng)：A-水，B-乙(yǐ)腈，A:B=75:25 （v/v）；

流(liú)速(sù)：1.0 mL/min；

柱溫(wēn)：室溫；

進樣量(liáng)：10 uL；

2 結果與討論(lùn)

本(běn)實驗對比了(liǎo)六種(zhǒng)色譜柱(zhù)對乳糖及蔗糖(táng)的分離(lí)效果(guǒ)，由(yóu)表(biǎo)1及(jí)圖(tú)1-5可(kě)知，依據2010版(bǎn)藥典(diǎn)，流(liú)動相(xiāng)為(wéi)乙(yǐ)腈(jīng):水(shuǐ)=75:25（v/v），柱溫為(wéi)室溫時，采用(yòng)Innoval NH₂色譜(pǔ)柱分離效果，分(fēn)離(lí)度為2.44。

表1. 不(bù)同氨(ān)基(jī)柱及HILIC色譜柱乳糖與蔗糖分(fēn)離測試(shì)數(shù)據(jù)對比（乙(yǐ)腈(jīng)：水=75：25）