液(yè)相色譜在使(shǐ)用過程中難免(miǎn)會(huì)遇到各(gè)種問題(tí)，在(zài)此(cǐ)，我們把液相在使(shǐ)用過(guò)程中出現頻(pín)率高的問題稱為(wéi)液(yè)相(xiāng)色(sè)譜(pǔ)的(dí)“公敵(dí)"--氣(qì)泡。

1，“公敵(dí)"簡(jiǎn)介

氣泡，在(zài)液相色(sè)譜的(dí)使用(yòng)過程中，被(bèi)提及(jí)多的(dí)一(yī)個名(míng)詞(cí)，它會帶(dài)來一係列(liè)的(dí)問(wèn)題(tí)，例(lì)如壓力(lì)波動(dòng)，基綫噪音(yīn)等問題，它絕對是(shì)早期(qī)液相(xiāng)色譜(pǔ)工(gōng)作者(zhě)的眼中(zhōng)釘，肉(ròu)中刺—“頭號公敵"。

2，“公敵(dí)"的產生(shēng)

1，液(yè)體對於氣(qì)體是有一定的(dí)溶解(jiě)度的。液體的壓力越(yuè)高，對(duì)氣體的(dí)溶(róng)解度(dù)越好。所以(yǐ)，當一瓶未(wèi)開封靜置的(dí)可樂，你(nǐ)是看(kàn)不到氣(qì)泡(pào)的(dí)，因(yīn)為(wéi)氣(qì)泡都(dū)溶解在(zài)裏麵了(liǎo)。當你開啟瓶蓋，直接的影響(xiǎng)就(jiù)是(shì)瓶子裏(lǐ)麵(miàn)的壓力(lì)降低(dī)了，對氣體的(dí)溶(róng)解度(dù)變小(xiǎo)，所以氣體就析出變(biàn)成一(yī)個(gè)個(gè)的(dí)小氣(qì)泡。

3，喝(hē)過(guò)啤酒或(huò)者碳酸(suān)飲料的人(rén)都有這樣(yàng)的經歷，當你搖晃瓶(píng)子(zǐ)，然(rán)後瞬間(jiān)把瓶(píng)蓋開(kāi)啟，啤(pí)酒或碳酸飲料(liào)瓶中會噴出(chū)大量泡沫，搖(yáo)晃的越(yuè)劇(jù)烈(liè)，噴射的(dí)越(yuè)猛，不難(nán)看出，溶解(jiě)氣(qì)體的液體在振(zhèn)蕩和(hé)運(yùn)動過程中，也容易(yì)讓氣泡析出。

4，上(shàng)學的時候(hòu)，化學課(kè)上，我(wǒ)們曾(zēng)經(jīng)懷(huái)疑過(guò)一個問(wèn)題：把一升甲醇倒進一生(shēng)純水裏(lǐ)麵，它(tā)的體(tǐ)積(jī)是(shì)不(bù)是兩(liǎng)升(shēng)？當我(wǒ)們(mén)親自試(shì)驗(yàn)後(hòu)，就排除(chú)了這(zhè)個疑問，而且我們可以明顯(xiǎn)看(kàn)到，當(dāng)兩(liǎng)種(zhǒng)液(yè)體(tǐ)混(hùn)合(hé)的時候，會有大(dà)量的(dí)氣泡(pào)冒出(chū)，體積也小於(yú)兩升(shēng)。

綜上(shàng)所(suǒ)述(shù)，溶解(jiě)在液體中(zhōng)的氣(qì)體，在遇到環境壓力(lì)變低，震蕩和(hé)運(yùn)動以及(jí)兩種(zhǒng)液體混(hùn)合的時(shí)候，都(dū)有利(lì)於氣泡的析(xī)出。

5，“公敵"的危害(hài)

對(duì)於液相色譜，泵(bèng)是液(yè)相色譜泵的功能載(zǎi)體(tǐ)，是(shì)將(jiāng)流(liú)動相(xiāng)以(yǐ)穩定(dìng)的流速(sù)通過(guò)色譜(pǔ)柱(zhù)，對想(xiǎng)要(yào)分析的(dí)化(huà)合(hé)物進行洗(xǐ)脫。對於(yú)泵(bèng)，穩定(dìng)性是至(zhì)關(guān)重要的。如果(guǒ)流(liú)動相(xiāng)在係統裏麵(miàn)的(dí)混合(hé)和(hé)運動過程中(zhōng)，有氣(qì)泡(pào)出(chū)來，問題(tí)也就(jiù)接踵而至(zhì)。假(jiǎ)設泵本來應該(gāi)輸出(chū)1ml/min的(dí)流(liú)動相，裏(lǐ)麵出(chū)現一點氣(qì)泡，體(tǐ)積就會發生變化，而且氣泡(pào)的可壓(yā)縮性很強，體(tǐ)積還容易(yì)忽大(dà)忽(hū)小(xiǎo)，流速也(yě)就不準(zhǔn)確(què)，也不再穩定。

氣(qì)泡(pào)的存(cún)在還會(huì)對(duì)檢測器產(chǎn)生危害，檢(jiǎn)測(cè)器(qì)位(wèi)於(yú)色譜柱出(chū)口，流動相從(cóng)色(sè)譜柱(zhù)末端(duān)出來，會有(yǒu)一個(gè)壓力的驟降，如(rú)果之前(qián)液體的壓力(lì)有(yǒu)100bar，那麼(mó)到(dào)了流通池(chí)內，壓力也(yě)隻有10bar左右。而壓(yā)力(lì)的(dí)降(jiàng)低會(huì)使(shǐ)流(liú)動(dòng)相中(zhōng)氣體的(dí)溶(róng)解度(dù)降低(dī)，從而(ér)導致氣(qì)泡的產生(shēng)，導致(zhì)檢(jiǎn)測器基(jī)綫不(bù)穩。

氣泡(pào)的另一(yī)個影響(xiǎng)與流動相中(zhōng)所溶解的氣體(tǐ)有關(guān)，假(jiǎ)如流動(dòng)相(xiāng)裏(lǐ)麵(miàn)溶解的(dí)是空氣，主(zhǔ)要含有(yǒu)氮氣和氧氣。一(yī)般來說，氮氣比較(jiào)穩(wěn)定(dìng)，但是氧(yǎng)氣比較活潑(pō)，它極有可能會跟某(mǒu)些樣(yàng)品(pǐn)發(fā)生反(fǎn)應(yīng)，造成(chéng)樣品的降解(jiě)。特(tè)別是(shì)當你想(xiǎng)要分析的樣(yàng)品裏(lǐ)麵含(hán)有一(yī)些(xiē)熒(yíng)光(guāng)基團，想要(yào)用熒(yíng)光檢(jiǎn)測(cè)器(qì)來檢測的話(huà)，流(liú)動(dòng)相裏溶(róng)解的(dí)氧氣(qì)會(huì)跟樣(yàng)品的(dí)熒光(guāng)基團(tuán)反應(yīng)，造成(chéng)熒(yíng)光(guāng)淬滅(miè)，從而導(dǎo)致檢測器無法檢測到該(gāi)化合物。

綜(zōng)上(shàng)所述，氣泡的(dí)危(wēi)害主要是造成(chéng)泵(bèng)的流(liú)量不(bù)準(zhǔn)，基綫噪音和(hé)可(kě)能(néng)會(huì)與樣品(pǐn)反(fǎn)應而(ér)影(yǐng)響檢(jiǎn)測。

6，“公敵(dí)"的消除

早期(qī)的氦吹脫氣(qì)是(shì)當(dāng)時業界標準，但(dàn)是其(qí)成(chéng)本(běn)高，操作(zuò)不(bù)便。後來又出(chū)現了抽真(zhēn)空脫(tuō)氣和(hé)超(chāo)聲(shēng)脫(tuō)氣(qì)，他(tā)們(mén)對(duì)很(hěn)多(duō)應用(yòng)來(lái)說，算是不錯的脫氣(qì)方(fāng)法，但(dàn)是(shì)這(zhè)些(xiē)仍不能阻擋(dǎng)氣泡時(shí)不時(shí)就(jiù)冒出(chū)來，給(gěi)我們(mén)製造(zào)各種(zhǒng)小麻(má)煩。直到在(zài)綫真(zhēn)空脫(tuō)氣機的出現，才使(shǐ)這一(yī)麻(má)煩迎(yíng)刃而(ér)解(jiě)。

在綫脫氣(qì)的原(yuán)理(lǐ)：流動相通(tōng)過(guò)真空腔(qiāng)內的一段半(bàn)透膜(mó)的(dí)管路，半(bàn)透(tòu)膜上麵的(dí)小(xiǎo)的孔道(dào)可以讓氣(qì)體分(fēn)子(zǐ)透(tòu)過而(ér)液(yè)體分子(zǐ)無(wú)法透(tòu)過(guò)，這樣流(liú)動相(xiāng)裏麵(miàn)溶解(jiě)的氣體分(fēn)子就(jiù)被(bèi)外麵(miàn)的真空(kōng)泵從(cóng)管道裏麵吸(xī)出(chū)來，經過(guò)脫氣的流動相繼續輸(shū)送到(dào)泵。

四，高效(xiào)液(yè)相色(sè)譜(pǔ)儀常見(jiàn)故(gù)障及(jí)解(jiě)決方(fāng)案

液(yè)相色譜(pǔ)儀(yí)在(zài)使用的(dí)過程中，可能(néng)會(huì)出現的故障：

1，流(liú)動相脫氣不(bù)充分；

2，流動相供(gōng)給不暢；

3，流動相和(hé)貯(zhù)液器(qì)被(bèi)汙(wū)染。

五，解(jiě)決方案(àn)：

1，流動(dòng)相脫氣(qì)不充(chōng)分，對流動(dòng)相(xiāng)進行再(zài)脫(tuō)氣(qì)，采(cǎi)用(yòng)更(gēng)有(yǒu)效(xiào)的(dí)脫氣方(fāng)法（如通(tōng)氮(dàn)氣保(bǎo)護）或兩種方(fāng)法配合使用，改(gǎi)變(biàn)係統內(nèi)混合(hé)為係統(tǒng)外(wài)低(dī)壓預混合。

2，流(liú)動相(xiāng)供給(gěi)不暢(chàng)，可(kě)能的原(yuán)因是(shì)流(liú)動相已接近(jìn)用完(wán)，管路吸入氣體引起泵(bèng)壓(yā)力不穩(wěn)，應(yīng)經(jīng)常(cháng)觀察(chá)貯液(yè)器(qì)中(zhōng)流動(dòng)相的(dí)量，加足流動相的量(liáng)保(bǎo)證所有(yǒu)的樣(yàng)品分析完(wán)畢；輸(shū)液(yè)管路(lù)上(shàng)安裝(zhuāng)沉子沉至瓶底(dǐ)，貯(zhù)液(yè)器(qì)蓋(gài)上(shàng)留(liú)一小孔(kǒng)正(zhèng)好夾住進液管(guǎn)，使其(qí)不(bù)能(néng)上下移動(dòng)；過濾器阻塞(sāi)會引起(qǐ)管(guǎn)道(dào)和泵腔空(kōng)化，也(yě)會使(shǐ)壓力(lì)不穩(wěn)；當過(guò)濾(lǜ)器(qì)被微粒所阻塞或長黴時，去掉過(guò)濾(lǜ)器後係(xì)統會(huì)運(yùn)轉正常，換上(shàng)新(xīn)過濾器即(jí)可(kě)；如果(guǒ)換(huàn)上(shàng)新(xīn)過(guò)濾器仍然不(bù)暢，那(nà)就需要檢查流(liú)動相(xiāng)的(dí)製備(bèi)過(guò)程，或者(zhě)換(huàn)大孔徑(jìng)的過濾(lǜ)器，流(liú)動相都(dū)要重新(xīn)過(guò)濾(lǜ)。流速(sù)過(guò)高(gāo)，阻力(lì)大，造(zào)成空化(huà)現象，這(zhè)是由於過濾(lǜ)器孔徑，管(guǎn)道內徑(jìng)，流速和(hé)溶劑黏度(dù)等引起的(dí)。出(chū)現這種情(qíng)況時，可嘗(cháng)試用下列(liè)方法解決：

1）改(gǎi)用低流速(sù)；

2）換大孔徑的(dí)過濾器；

3）增加進液管路內(nèi)徑(jìng)；

4）抬高或加壓貯液器；

5）臨(lín)時不(bù)用入(rù)口過濾器（流動相確保(bǎo)做好過濾）；

其它(tā)問題，包(bāo)括滲(shèn)漏(lòu)或接頭鬆(sōng)動，低壓(yā)混合(hé)器過濾(lǜ)器阻(zǔ)塞，泵部件損(sǔn)壞(huài)（密封(fēng)墊等(děng)），都能引起(qǐ)流(liú)動相供(gōng)液(yè)不(bù)正常(cháng)，注意檢查排除。

3，貯液(yè)器或(huò)流動相被(bèi)汙染，會(huì)出現一(yī)些(xiē)問(wèn)題(tí)：產生有(yǒu)規(guī)則(zé)的(dí)噪(zào)音增(zēng)大，檢測(cè)器基(jī)綫上(shàng)升等現(xiàn)象。流動(dòng)相(xiāng)中的(dí)汙染(rǎn)物可能會(huì)被泵以(yǐ)穩定的(dí)濃度打入(rù)係統，而後再以穩定的(dí)濃(nóng)度(dù)流出來(lái)，所以在色譜圖中不出多餘的(dí)峰(fēng)。

不幹淨(jìng)的貯(zhù)液(yè)器會汙染清(qīng)潔的流動相，每(měi)種流(liú)動相要(yào)備(bèi)有(yǒu)專(zhuān)用的(dí)貯液器，或者定期報廢(fèi)貯(zhù)液器，都是良(liáng)好的工(gōng)作(zuò)習(xí)慣(guàn)。流(liú)動相(xiāng)汙染源(yuán)來自(zì)這(zhè)幾個方(fāng)麵(miàn)：試(shì)劑(jì)質(zhì)量(liáng)不高，玻(bō)璃器(qì)皿不合格(gé)，微(wēi)生物(wù)的(dí)影響，配製流動(dòng)相(xiāng)時操(cāo)作不(bù)當等，因此要求用高純(chún)度化學試劑(jì)和HPLC級溶劑，一旦發現試劑有(yǒu)問題應堅決報廢掉(diào)。

玻(bō)璃器(qì)皿應(yīng)按(àn)規(guī)定(dìng)清(qīng)洗幹淨，為(wéi)防止(zhǐ)生長(cháng)微(wēi)生(shēng)物(wù)，每(měi)天(tiān)要按(àn)前述的方法清洗(xǐ)係(xì)統；懷疑係統(tǒng)內生長了(liǎo)微生(shēng)物時(shí)，可用稀硝(xiāo)酸衝洗(xǐ)(注(zhù)意不(bù)要損壞柱和管路係(xì)統)，在(zài)緩衝(chōng)液內加生(shēng)長抑製劑（0.04%疊(dié)氮(dàn)鈉）或(huò)冷藏緩衝液；每天(tiān)用0.2μm的過濾器(qì)過濾(lǜ)緩衝液(yè)，也會(huì)有效地防止(zhǐ)微生(shēng)物汙(wū)染(rǎn)係(xì)統；真(zhēn)空脫氣時(shí)要(yào)防(fáng)止泵(bèng)油(yóu)帶入流動相；應該(gāi)用清潔的(dí)惰性(xìng)塞(sāi)子，攪(jiǎo)捧，過濾(lǜ)器(qì)和(hé)玻璃器皿配(pèi)製流動(dòng)相(xiāng)；已經汙(wū)染的(dí)色譜儀流(liú)動相一(yī)定要(yào)廢棄(qì)掉。

六(liù)，總結

懂這(zhè)些(xiē)就能輕鬆(sōng)解決高(gāo)效液(yè)相色(sè)譜(pǔ)儀故(gù)障了！儀(yí)器設備的良好(hǎo)運行離不(bù)開平(píng)時的規(guī)範操(cāo)作(zuò)和(hé)正確的(dí)維(wéi)護(hù)保(bǎo)養，熟(shú)悉儀器設備的基本操作，了解儀器(qì)設(shè)備(bèi)的(dí)維護(hù)保養方法(fǎ)，是每一(yī)個(gè)化(huà)工(gōng)實驗(yàn)室研發(fā)人(rén)員(yuán)必須(xū)具(jù)備的基(jī)本(běn)實驗(yàn)素(sù)養(yǎng)，具備了(liǎo)這些基本(běn)實驗(yàn)素養(yǎng)後，才(cái)能(néng)保(bǎo)證化工實(shí)驗室研(yán)發項目順(shùn)利(lì)，安全，高效(xiào)地進行。