食品中(zhōng)四(sì)種甜味(wèi)劑(jì)的測定方法(fǎ)液相(xiāng)色譜(pǔ)法(fǎ)

1 範(fàn)圍(wéi)

本標準(zhǔn)參(cān)照(zhào)DB13/T 1112-2009規定(dìng)了食(shí)品中乙(yǐ)酞(tài)磺(huáng)胺酸鉀
，糖精(jīng)鈉(nà)
，環(huán)己(jǐ)基(jī)氨基磺酸鈉
，阿(ā)斯巴甜的測定(dìng)方法。本標準適用於(yú)飲料中乙酞磺胺酸鉀
，糖(táng)精鈉(nà)
，環(huán)己(jǐ)基(jī)氨基(jī)磺酸鈉
，阿斯巴甜(tián)的測定。本方法(fǎ)乙酞(tài)磺(huáng)胺(àn)酸鉀(jiǎ)的(dí)檢出限為0.05ug/mL；糖精(jīng)鈉(nà)的(dí)檢出(chū)限(xiàn)為(wéi)0.05ug/mL；環己基氨基磺(huáng)酸鈉的(dí)檢(jiǎn)出(chū)限(xiàn)為2.0ug/mL；阿(ā)斯巴(bā)甜的(dí)檢(jiǎn)出限(xiàn)為0.05ug/mL;

2 規(guī)範(fàn)性(xìng)引用(yòng)文(wén)件

下列(liè)文件(jiàn)中的條(tiáo)款通(tōng)過(guò)本標準(zhǔn)的(dí)引用(yòng)而成(chéng)為本標(biāo)準的條(tiáo)款。凡是注日(rì)期的(dí)引(yǐn)用(yòng)文件
，其隨後(hòu)所有(yǒu)的修改單（不(bù)包括勘誤(wù)的(dí)內(nèi)容(róng)）或(huò)修訂(dìng)版均(jūn)不適(shì)用於本(běn)標(biāo)準(zhǔn)
，然而
，鼓勵根據(jù)本(běn)標準達成協議的各(gè)方研(yán)究是(shì)否可使用(yòng)這些文件的版本(běn)。凡(fán)是(shì)不(bù)注(zhù)日期的引用文(wén)件
，其(qí)版(bǎn)本適用於(yú)本標準。

GB/T6682分析(xī)實(shí)驗用(yòng)水規格(gé)和試驗方法(fǎ)

3 原(yuán)理(lǐ)

樣品中甜味劑在酸性溶液中以(yǐ)陰(yīn)離子形(xíng)式
，選(xuǎn)用含有(yǒu)類離子對試劑(jì)（tris)的甲(jiǎ)醇水(shuǐ)溶液(yè)作流(liú)動相(xiāng)
，采(cǎi)用反相離子(zǐ)對液相(xiāng)色譜法(fǎ)分(fēn)離
，根(gēn)據(jù)色(sè)譜(pǔ)峰的(dí)保(bǎo)留時(shí)間定性(xìng)
，根據(jù)峰高或峰(fēng)麵積定量。

4 試(shì)劑

除另有規定
，所有試劑均(jūn)為分析純
，為GB/T6682規定的一(yī)級水。

4.1甲醇(chún)：色譜純。

4.2稀(xī)氨水(shuǐ)（(1+1):氨(ān)水加水等體(tǐ)積(jī)混合(hé)。

4. 3 Tris儲(chǔ)備(bèi)液(yè)（(0. 5mol/L）：稱取6.057g三（羥甲基）氨基甲烷溶於超純水(shuǐ)中(zhōng)定(dìng)容到100mL,混合均匀(yún)。

4.4乙酞(tài)磺胺(àn)酸鉀(jiǎ)
，糖(táng)精鈉(nà)
，環己(jǐ)基(jī)氨(ān)基磺酸(suān)鈉
，阿(ā)斯巴(bā)甜(tián)標準(zhǔn)品(pǐn)：純度≥99%。

4.5乙酞磺胺(àn)酸(suān)鉀(jiǎ)
，糖精(jīng)鈉
，環己(jǐ)基氨基(jī)磺酸(suān)鈉(nà)
，阿(ā)斯巴甜標準(zhǔn)儲(chǔ)備(bèi)溶液：精(jīng)密(mì)秤(chèng)取乙酞磺(huáng)胺(àn)酸鉀，糖精鈉(nà)各0.1000g
，用超純水溶(róng)解(jiě)稀(xī)釋至10mL；環己基氨基(jī)磺酸鈉1.0000g
，用(yòng)超純(chún)水(shuǐ)溶解(jiě)稀釋(shì)至10mL；阿斯巴(bā)甜0.1000g用1:1甲醇水溶(róng)液(yè)溶解稀釋至10mL；阿(ā)斯巴(bā)甜，乙酞磺(huáng)胺酸鉀，糖精(jīng)鈉濃度分別為：10.0mg/mL；環己(jǐ)基氨(ān)基磺酸(suān)鈉濃(nóng)度為(wéi)：100.0mg/mL：於冰箱(xiāng)保存。

4.6混合(hé)標準(zhǔn)使(shǐ)用(yòng)溶(róng)液：取(qǔ)一定量(liáng)上述(shù)標(biāo)準儲備(bèi)液混合(hé)
，用超純水逐級稀釋
，配(pèi)成乙酞磺胺酸(suān)鉀
，糖精鈉
，阿斯(sī)巴(bā)甜(tián)為1.0mg/mL的混合標準使用液(yè)
，環己基(jī)氨基(jī)磺(huáng)酸鈉(nà)濃(nóng)度為10.Omg/mL的(dí)標(biāo)準使(shǐ)用液。

4. 7混(hùn)合標準使(shǐ)用(yòng)係(xì)列溶液(yè)：準確吸(xī)取混合標(biāo)準使用液0. 00mL, 0. 05mL, 0. 10mL, 0. 20mL, 0. 40mL, 0. 60mL
，環己基(jī)氨(ān)基磺酸(suān)鈉(nà)標準使用液0. 00mL, 0. 10mL, 0. 50mL, 1. 0mL, 2. 0mL, 4. 0mL加超(chāo)純(chún)水定(dìng)容至(zhì)10mL
，配(pèi)成標準係列(liè)。其中(zhōng)
，乙(yǐ)酞(tài)磺胺酸鉀(jiǎ)，阿斯(sī)巴甜，糖(táng)精(jīng)鈉(nà)其濃(nóng)度為0.0ug/mL,5.0ug/mL, 10.0ug/mL, 20.0ug/mL, 40.0ug/mL, 60.0ug/mL
，環(huán)己基(jī)氨(ān)基磺(huáng)酸(suān)鈉濃度0.0mg/mL,0.1mg/mL,0.5mg/mL,1.0mg/mL,2.0mg/mL,4.0mg/mL
，置(zhì)於冰箱冷(lěng)藏保(bǎo)存。

5 儀器(qì)

5.1液相色譜儀(yí)（501液相色譜儀(yí)）
，UV-501紫(zǐ)外(wài)檢測(cè)器(qì)。

5.2超聲波清洗器(qì)，AP-01無(wú)油真空(kōng)泵(bèng)。

5.3離(lí)心(xīn)機(jī)。

5.4抽(chōu)濾(lǜ)瓶(píng)。

5. 5微孔濾膜：0.45nm。

5.6電子天平(píng)：感量(liáng)0.0001g和0.01 g。

6 分析(xī)步(bù)驟

6.1樣品處(chǔ)理：

稱取5.0g-10.0g（到0.01g)試樣(yàng)
，用(yòng)氨水（1+1)調(tiáo)pH至(zhì)7
，加水定容至適當體(tǐ)積(jī)
，離

心沉(chén)澱
，上(shàng)清(qīng)液經45u m濾(lǜ)膜(mó)過濾
，濾液作(zuò)HPLC分(fēn)析用。

6. 2測(cè)定

6.2.1 HPLC參(cān)考條件

分析(xī)柱：VertexC18色(sè)譜柱
，4.6mmx250mm粒(lì)度5um

流(liú)動相：甲(jiǎ)醇(chún)：5mmol/LTris緩(huǎn)衝(chōng)溶液（pH4.5）=5: 95。

波長(cháng)：205nm。

流速(sù)：1.2 mL/min。

柱溫：25℃

6.2.2標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)：分別(bié)進(jìn)樣(yàng)阿(ā)斯巴(bā)甜(tián)，乙酞(tài)磺(huáng)胺(àn)酸鉀，糖精鈉(nà)和(hé)環己(jǐ)基氨基(jī)磺酸(suān)鈉標準係(xì)列溶液各10uL
，進(jìn)行HPLC分析(xī)
，然後以峰麵(miàn)積(jī)為縱坐(zuò)標
，以(yǐ)四(sì)種甜味劑的含量(liáng)為橫坐標(biāo)
，繪製標(biāo)準曲(qū)綫。

6.2.3試樣測(cè)定：吸(xī)取6.1處理後的試樣(yàng)溶液10uL進行HPLC分(fēn)析(xī)
，測定(dìng)其峰(fēng)麵積
，從標準(zhǔn)曲綫查得測定(dìng)液(yè)中(zhōng)四(sì)種(zhǒng)甜(tián)味(wèi)劑(jì)的(dí)含量

7 結果計(jì)算

試(shì)樣中甜味(wèi)劑(jì)成分(fēn)的含(hán)量按下式計(jì)算：

X=cxVxl000/m x 1000

式中：

X-試樣中甜(tián)味劑成分的含量
，單位為(wéi)毫克(kè)每千克（mg/kg);

c-由標(biāo)準曲綫(xiàn)上查(chá)得(dé)進樣液中甜味劑(jì)成分的(dí)量
，單位為(wéi)微(wēi)克(kè)每(měi)毫升(shēng)(ug/mL);

V-試樣稀釋液總體(tǐ)積
，單位(wèi)為毫升（mL);

m-試樣質(zhì)量(liáng)
，單位為克(kè)（g)

計算結果保(bǎo)留(liú)兩位(wèi)有(yǒu)效(xiào)數字(zì)。

8 精(jīng)密度(dù)

在重復性(xìng)條件下獲得的兩(liǎng)次(cì)獨(dú)立測定結果的(dí)差值(zhí)不得超(chāo)過(guò)算(suàn)術平均(jūn)值的10%.

1．乙(yǐ)酞磺胺酸(suān)鉀（acesulfame-K);

2．阿斯(sī)巴甜(aspartame) ;

3．環(huán)己(jǐ)基氨基磺(huáng)酸鈉（sodiumcyclamate) ;

4.糖(táng)精鈉(nà)（sodiumsaccharina)