山楂提取(qǔ)物具(jù)有抗氧化，清(qīng)除(chú)自(zì)由基(jī)等作(zuò)用。多(duō)數學者(zhě)認為(wéi)
，黃酮和低聚前花青素(sù)是山楂提取物的兩類(lèi)主要活(huó)性物質。用(yòng)液相色(sè)譜(pǔ)法(HPLC)對(duì)其進行分(fēn)析的(dí)報道較(jiào)多(duō)
，但(dàn)是(shì)到(dào)目(mù)前(qián)為(wéi)止尚未見到能(néng)同時(shí)分析這些成(chéng)分的(dí)令人滿意的(dí)方法。本文建(jiàn)立了一(yī)種能同時分析山(shān)楂(zhā)果實中這(zhè)些活性成分的HPLC方(fāng)法。

　　
　　1實驗部(bù)分(fēn)
　　
　　1．1試驗材(cái)料
　　
　　表兒(ér)茶(chá)素，綠原(yuán)酸
，購於Sigma公(gōng)司(sī)；前(qián)花青素(sù)B2，金絲桃苷，Isoquercitrin
，購於日本(běn)Funakoshi試劑公(gōng)司(sī)；前(qián)花(huā)青素(sù)B5，C1
，以山楂(zhā)果(guǒ)為(wéi)原料經SephadexLH20柱(zhù)分離，製備型HPLC精製。其(qí)餘試劑為分(fēn)析純。
　　
　　1．2樣(yàng)品(pǐn)處理方法(fǎ)
　　
　　取山楂果去(qù)籽切(qiē)碎(suì)混匀(yún)
，稱(chēng)取2g放入研缽(bō)中(zhōng)
，加(jiā)甲醇2mL，50％磷酸水溶液100μL
，研磨後用甲醇轉移到25mL容(róng)量(liáng)瓶中定容(róng)
，用超聲波振(zhèn)蕩提(tí)取l0min
，取1mL於4000r/min轉(zhuǎn)速下離(lí)心5min
，上(shàng)清液過(guò)0.45μm濾膜備(bèi)用。
　　
　　1．3色(sè)譜分(fēn)析條件
　　
　　液相(xiāng)色譜係統(tǒng)由兩(liǎng)台P200Ⅱ高壓恒(héng)流泵，UV200Ⅱ紫外(wài)．可變(biàn)波長(cháng)檢測器以及(jí)Echrom98色譜(pǔ)工作(zuò)站(zhàn)等(大連(lián)依(yī)利特(tè)分析儀(yí)器(qì)有(yǒu)限公(gōng)司(sī))組(zǔ)成(chéng)。色譜柱為HYPERSILBDS分(fēn)析柱(zhù)(200mm×4.6mmi．d．
，5μm)。流動(dòng)相(xiāng)A：20％(體積(jī)分數)甲醇(chún)水(shuǐ)溶(róng)液(pH3.2O)
，流(liú)動相B：30％(體積分數)乙腈水溶(róng)液(yè)(pH3.2O)
，得(dé)綫性(xìng)梯(tī)度洗(xǐ)脫程序；流速0.6mL／min；檢測波(bō)長280nm；進樣量1OμL；以外標法定量。
　　
　　2結果與討(tǎo)論
　　
　　2．1色譜(pǔ)條件的確定(dìng)
　　
　　山(shān)楂果(guǒ)實(shí)中(zhōng)活(huó)性物質大(dà)多為多(duō)酚類(lèi)成(chéng)分
，這些成分的極(jí)性差異很(hěn)大
，很難在等(děng)度(dù)洗(xǐ)脫條件下(xià)同時分離(lí)。在(zài)乙(yǐ)腈-水(shuǐ)體係(xì)中弱(ruò)極(jí)性的黃(huáng)酮類(lèi)成分保(bǎo)留時間(jiān)較長
，分(fēn)離效(xiào)果(guǒ)較(jiào)好(hǎo)；而(ér)甲醇-水(shuǐ)體係對低聚前花青(qīng)素(sù)類(lèi)極性(xìng)成(chéng)分的洗脫能力較強
，適於樣(yàng)品(pǐn)中極(jí)性(xìng)成(chéng)分的(dí)分(fēn)離。在(zài)酸性體係下(xià)酚酸成(chéng)分(fēn)分離較好(hǎo)
，其他(tā)酚類成分(fēn)也需(xū)要在(zài)酸性條(tiáo)件下(xià)進(jìn)行(háng)分(fēn)離
，所以把(bǎ)流(liú)動(dòng)相pH確(què)定為(wéi)3.1O～3.2O。綠原酸，兩(liǎng)種黃(huáng)酮和前花(huā)青素類(lèi)物(wù)質(zhì)在280nm處都(dū)有較(jiào)強的信(xìn)號
，故確(què)定(dìng)檢(jiǎn)測(cè)波長(cháng)為280nm。本文采(cǎi)用(yòng)酸性(xìng)的甲醇(chún)水(shuǐ)溶液(yè)和(hé)乙腈水溶(róng)液(yè)在優(yōu)化(huà)的梯度洗(xǐ)脫程序下洗(xǐ)脫
，使山楂的主(zhǔ)要(yào)活(huó)性(xìng)成(chéng)分在35min內得到了較好(hǎo)的(dí)分離。
　　
　　2．2方法(fǎ)評(píng)價(jià)
　　
　　在(zài)梯(tī)度條(tiáo)件下(xià)
，用綠(lǜ)原酸
，表兒茶(chá)素
，前(qián)花(huā)青素(sù)B2，B5，C1
，金絲(sī)桃苷(gān)和(hé)Isoquercitrin標準(zhǔn)品(pǐn)進(jìn)行分(fēn)析
，各成分的(dí)回歸(guī)方(fāng)程(Y：峰麵積；X：含(hán)量
，μg)和(hé)相(xiāng)關係數r依(yī)次為：Y=1.354 29.93
，r=0.9998；Y=1.O54X一3.748
，r=0.9998；Y=0.673一(yī)22.489
，r=0.9997；Y=0.538 4.665．r=0.9999；Y=0.700X一(yī)6.614
，r=0.9998；Y=2.393 46.250
，r=0.9995；Y=2.855一(yī)90.520
，r=0.9996。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)分別為：2.15％
，2.21％
，4.57％
，2.69％
，3.06％
，1.44％
，1.38％。綫(xiàn)性(xìng)範圍(wéi)(μg)分別(bié)為：0.O689～0.2260
，0.0469～0.3350
，0.1355～0.3660
，0.1250～0.8230
，0.1282～0.6510．0.2078～0.9870
，0.3275～0.8370。回收(shōu)率分別(bié)為：95.2％
，105.8％
，103.996
，
　　
　　97.7％
，96.2％
，93.9％和94.O％。方(fāng)法準確靈敏
，定(dìng)量(liáng)可(kě)靠。