果(guǒ)汁果膠中(zhōng)防腐劑和(hé)甜味劑的高效液相色譜儀(yí)(HPLC)檢測(cè)方案
食品加工(gōng)工藝(yì)和防(fáng)腐的需要，以(yǐ)及為(wéi)了(liǎo)改善食品品(pǐn)質和(hé)色，味，香(xiāng)，在(zài)食(shí)品生(shēng)產加(jiā)工過程中，食品中(zhōng) 通常會(huì)加(jiā)入(rù)少量的天然或者(zhě)化學合(hé)成的物質。近(jìn)幾(jī)年(nián)，由於食(shí)品(pǐn)安全(quán)問題層(céng)出不(bù)窮，人們(mén)越(yuè)來越重視(shì)食 品添(tiān)加(jiā)劑所(suǒ)帶(dài)來(lái)的安(ān)全隱(yǐn)患(huàn)。

以(yǐ)下是苯(běn)甲(jiǎ)酸，山(shān)梨(lí)酸(suān)和安賽蜜，糖精(jīng)鈉的(dí)詳細(xì)檢測(cè)方(fāng)法(fǎ)。

1，儀(yí)器與試(shì)劑

1.1 儀(yí)器

高效液相色譜(pǔ)儀

Vertex 色譜(pǔ)柱(zhù) 250mm×4.6mm×5μm； 超聲(shēng)波水浴振(zhèn)蕩(dàng)器；

食品粉碎機；

pH 計；

天(tiān)平：分度值(zhí)為(wéi) 0.001 mg。

1.2 試劑

甲醇：色(sè)譜純(chún)

乙(yǐ)酸(suān)銨溶液：稱取 1.54 g 乙酸銨，加(jiā)水溶解(jiě)並(bìng)稀釋(shì)至(zhì) 1000 mL，經 0.45μm 微孔濾(lǜ)膜過濾(lǜ)。 亞鐵(tiě)氰話鉀溶(róng)液(yè)：稱取 106 g 亞鐵(tiě)青(qīng)化鉀[K3Fe(CN)6•3H2O]加水(shuǐ)至 1000 mL。

乙(yǐ)酸鋅(xīn)溶液(yè)：稱(chēng)取 220g 乙酸鋅[Zn(CH3COO)2•2H20]溶於少量水中(zhōng)，加入 30mL 冰(bīng)乙酸，加(jiā)水稀釋至(zhì)l000mL。

氨水(shuǐ)(1+1)：氨(ān)水(shuǐ)與水等體積(jī)混(hùn)合。

2，色譜(pǔ)條(tiáo)件

色譜柱(zhù)：Vertex C18 柱，250mm x 4.6 mm，5μm； 流動相：甲醇+0.02mol/l 乙酸銨溶(róng)液(5:95)； 流(liú)速(sù)：1 mL／min；

進樣(yàng)量(liáng)：20μL； 檢(jiǎn)測(cè)波長 230nm。

3，試樣(yàng)溶液(yè)的製備

3.1 含脂肪，蛋白(bái)的樣品

稱(chēng)取(qǔ)約 10g 左(zuǒ)右樣(yàng)品於(yú)燒杯(bēi)中(zhōng)（固(gù)體樣品要(yào)用攪(jiǎo)拌(bàn)機(jī)攪碎），加(jiā)入約(yuē) 60ml 蒸(zhēng)餾水(shuǐ)，再超(chāo)聲波水(shuǐ)浴振蕩10 分(fēn)鐘(zhōng)，然(rán)後(hòu)用轉移到(dào) 100ml 比色管(guǎn)中(zhōng)，並(bìng)用(yòng)少量(liáng)水潤洗(xǐ)幹(gān)淨燒杯(bēi)； 加入(rù) 5ml 亞鐵(tiě)氰化(huà)價(jià)溶液，搖(yáo)匀(yún)，再加入 5 mL 乙酸鋅溶液(yè)，搖(yáo)匀(yún)； 根據(jù) PH 計(jì)讀(dú)數，用(yòng)氨水(shuǐ)調節(jié) PH 至(zhì)接近中性；用(yòng)水定(dìng)容至(zhì) 100ml 刻度，搖匀，用(yòng)三角(jiǎo)瓶(píng),濾紙，玻(bō)璃棒(bàng)，漏(lòu)鬥過(guò)濾； 吸(xī)取濾(lǜ)液(yè)約 1.5ml，用(yòng)微(wēi)孔濾膜(mó)過濾(lǜ)，濾液(yè)待(dài)上(shàng)機分(fēn)析。

3.2 不含脂肪(fáng)，蛋白的(dí)樣(yàng)品

稱(chēng)取約 10g 左右樣品於(yú)燒杯(bēi)中(zhōng)（固(gù)體樣(yàng)品要用攪拌機(jī)攪碎(suì)），加入約 60ml 蒸(zhēng)餾水，再超聲波水(shuǐ)浴(yù)振(zhèn)蕩10 分鐘(zhōng)，然後轉移(yí)到(dào) 100ml 比色(sè)管中，並用(yòng)少(shǎo)量水潤洗幹淨燒杯(bēi)； 根據 PH 計讀(dú)數(shù)，用氨(ān)水調節(jié) PH 至接(jiē)近(jìn)中(zhōng)性；用(yòng)水定(dìng)容(róng)至 100ml 刻(kè)度，搖匀，用(yòng)三(sān)角瓶,濾紙，玻璃(lí)棒，漏鬥過濾； 吸取濾液約 1.5ml，用微(wēi)孔濾膜過(guò)濾(lǜ)，濾(lǜ)液待(dài)上(shàng)機分(fēn)析。

注：1-安(ān)賽(sài)蜜(mì)；2-苯(běn)甲酸；3-山(shān)梨酸；4-糖(táng)精鈉；混(hùn)合標準(zhǔn)溶液色譜圖(tú)

4，結(jié)果分(fēn)析(xī)

4.1 儀(yí)器(qì)精 確(què)度的(dí)測(cè)定

取(qǔ)濃度(dù)為(wéi)苯甲(jiǎ)酸，山梨(lí)酸(suān)，糖(táng)精鈉，安(ān)賽蜜(mì)濃度為 10.0ug/ml，平行(háng)測定 7 次。

表 1：精 確(què) 度(dù)的(dí)測(cè)定(dìng)結果

分析(xī)結果可(kě)以得出，每個組(zǔ)分(fēn)峰麵(miàn)積的相對(duì)標準偏差(chà)均(jūn)小(xiǎo)於 1％，表(biǎo)明儀器(qì)在選定(dìng)條件下(xià)重現(xiàn)性(xìng)好(hǎo)， *可以滿足分(fēn)析(xī)測(cè)定的要求。

4.2 回收率(shuài)的測定

分析結(jié)果的準(zhǔn)確度可(kě)以用回收率(shuài)來衡量。回收率越接(jiē)近 100％，測(cè)得(dé)的(dí)結果(guǒ)越接(jiē)近真(zhēn)值，即(jí)準確(què)度(dù)越好。 同時(shí)平行測(cè)定(dìng)結(jié)果的相(xiāng)對(duì)標準(zhǔn)偏差可以表(biǎo)明方法的重(zhòng)現性(xìng)。

取清(qīng)涼(liáng)茶(chá)，樣品分別(bié)進行加標實驗，加入(rù)苯甲酸(suān)，山梨酸(suān)，糖精(jīng)鈉，安(ān)賽(sài)蜜濃度(dù)均(jūn)為 10.00ug/ml 標(biāo) 準溶液，平行測(cè)樣(yàng) 7 次(cì)，進行(háng)回收(shōu)率實驗。測定結果見表 2。

表(biǎo) 2：清涼(liáng)茶的(dí)加標(biāo)測定結果和(hé)回收(shōu)率(shuài)

從(cóng)上表可以(yǐ)看(kàn)出(chū)清涼(liáng)茶的加標測定(dìng)的回(huí)收(shōu)率(shuài)：苯甲酸為(wéi) 98.5%-103.4%，山梨(lí)酸(suān)為 98.3%-103.1%，糖(táng) 精鈉為(wéi) 97.5%-104.3%,安賽(sài)蜜為 98.4%-103.3%。各組分的(dí)回收率都接近(jìn) ，滿足日(rì)常檢(jiǎn)測(cè)的(dí)要求。