一(yī).儀(yí)器(qì)

  液(yè)相色譜儀，紫外(wài)檢測器；離(lí)心(xīn)機_；旋轉(zhuǎn)蒸(zhēng)發(fā)儀；K-D濃縮(suō)器。

二.試劑

  激素(sù)標(biāo)準(zhǔn)貯(zhù)備(bèi)液(yè)：分別(bié)稱取雌(cí)三醇(chún)，雌(cí)二醇，雌(cí)酮(tóng)，睾酮，孕(yùn)酮(tóng)0.1000g，用甲(jiǎ)醇溶(róng)解(jiě)並定容(róng)至(zhì)100mL，每(měi)毫(háo)升含(hán)各種激素(sù)均(jūn)為1.000mg。

  激素標(biāo)準使(shǐ)用液(yè)：精(jīng)密吸(xī)取一(yī)定(dìng)量(liáng)的激素標準品和內(nèi)標貯(zhù)備(bèi)液(yè)，用甲(jiǎ)醇(chún)配製(zhì)成每(měi)毫升(shēng)含各種激素為10.00μg，an眠(mián)酮(tóng)2.00μg和每毫(háo)升含各種激(jī)素2.00μg，an眠(mián)酮2.00μg的兩種(zhǒng)標準使用液(yè)。

三.實驗步(bù)驟

  1.樣(yàng)品的處(chǔ)理

  取可食部(bù)分，搗(dǎo)成均漿(jiāng)，稱取50g左(zuǒ)右(yòu)置(zhì)250mL具(jù)塞(sāi)三角瓶中(zhōng)。在上(shàng)述樣品(pǐn)中加入(rù)an眠(mián)酮20.00μg/mL的(dí)內標貯備液(yè)1.0mL，加甲(jiǎ)醇(chún)+丙酮(tóng)（1+1）混合(hé)溶液150mL，在振蕩器(qì)上振(zhèn)搖(yáo)提(tí)取30min。用(yòng)快速(sù)濾(lǜ)紙(zhǐ)過(guò)濾，殘渣用(yòng)少量(liáng)甲(jiǎ)醇(chún)+丙酮(tóng)（1+1）混合液洗(xǐ)滌(dí)數次，洗液並(bìng)入(rù)濾液中(zhōng)，於(yú)旋轉(zhuǎn)蒸(zhēng)發(fā)儀(yí)或(huò)K-D濃縮(suō)器中將溶劑(jì)蒸除。殘渣(zhā)用甲醇20mL溶(róng)解(jiě)，經(jīng)盛(shèng)有無(wú)水(shuǐ)*的漏(lòu)鬥(dǒu)濾入(rù)250mL分液(yè)漏鬥中(zhōng)，再用10mL甲醇(chún)分數(shù)次(cì)洗滌(dí)漏(lòu)鬥及(jí)內容(róng)物，洗液(yè)並入濾(lǜ)液(yè)中，加pH=5.2的醋酸(suān)鈉緩衝(chōng)液(yè)80mL左右(yòu)，混匀(yún)後(hòu)二氯(lǜ)甲(jiǎ)烷50mL，30mL，30mL振(zhèn)搖提(tí)取3次。合並提取(qǔ)液並(bìng)用(yòng)無水*脫(tuō)水(shuǐ)，在(zài)水(shuǐ)浴上揮幹溶(róng)劑，殘渣用甲醇溶(róng)解並定容(róng)至10.0mL，混(hùn)匀後(hòu)，以3000r/min速(sù)度離(lí)心5min，取(qǔ)上(shàng)清(qīng)液(yè)供(gōng)色譜分(fēn)析(xī)用(yòng)。

  2.液(yè)相色譜參考(kǎo)條(tiáo)件(jiàn) 

  ① 色譜柱：HP-ODS 4.6mm×200mm。

  ② 流動(dòng)相(xiāng)：乙腈+甲醇+*+0.01mol/L 醋(cù)酸鈉溶(róng)液（20+20+10+50）。

  ③ 流速：1.0mL/min。

  ④ 測定波長：270nm。

  ⑤ 進(jìn)樣體積(jī)：10μL。

  3.樣品測(cè)定

  取(qǔ)供(gōng)色譜測(cè)定(dìng)的樣品(pǐn)溶液(yè)10μL，注入(rù)液(yè)相(xiāng)色譜儀(yí)，以內(nèi)標(biāo)法定量。